将琼脂和胰蛋白胨溶解在水中，加热煮沸(琼脂提供)
琼脂培养基是一种用来培养微生物的固体培养基，由琼脂、胰蛋白胨和水组成。琼脂是一种多糖，提供培养基的凝固性，而胰蛋白胨则提供微生物生长所需的营养物质。
材料
- 琼脂粉 15 克
- 胰蛋白胨粉 10 克
- 水 1 升
步骤
- 将琼脂粉和胰蛋白胨粉溶解在水中。可以使用搅拌器或磁力搅拌器混合均匀。
- 将混合物加热至沸腾，持续搅拌，直到琼脂完全溶解。溶解的琼脂液体将变得透明无色。
- 将溶液从热源中取出，静置冷却至约 50-60°C。
- 将冷却后的溶液倒入无菌培养皿或试管中。培养皿或试管必须提前消毒。
- 待培养基完全凝固后，即可用于微生物培养。
注意事项
- 琼脂粉的浓度会影响培养基的硬度。浓度越高，培养基越硬。
- 如果培养基在凝固前倒入培养皿或试管中，会形成半固体培养基。半固体培养基通常用于培养厌氧菌或其他对氧气敏感的微生物。
- 培养基应在无菌条件下制备和使用，以防止微生物污染。
应用
琼脂培养基广泛用于微生物培养。它可以用于分离、纯化和鉴定微生物。琼脂培养基还可以用于研究微生物的生长、代谢和基因表达。[常用培养基配方] 万能培养基配方
十七 常用培养基配方 17.1 营养琼脂培养基 成分 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 氯化钠 5g 琼脂 15~20g 蒸馏水 1000mL 制法： 将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2ML，校正PH7.2—7.4，加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。 分装在三角锥瓶中，在121℃下高压灭菌15分钟。 17.2 乳糖胆盐发酵管培养基（单料） 成分 蛋白胨 20g 猪胆盐 5g 乳糖 10g 0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL 蒸馏水 1000ml PH7.4 制法 将蛋白胨，胆盐及乳糖溶于水中，校正PH值，加入指示剂分装，每支管10ml，并放入一个小倒管（产气管），在115℃下高压灭菌15分钟。 注：双料乳糖胆盐发酵管培养基除蒸馏水外，其他成分加倍。 17.3 乳糖发酵管培养基（单料） 成分 蛋白胨 20g 乳糖 10g 0.04%溴甲酚紫水溶液 25ml 蒸馏水 1000ml PH7.4 制法 将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正PH，加入指示剂分装，每支管3ml，并放入一个小倒管（产生气），在115℃下高压灭菌15分钟。 注：双料乳糖发酵管培养基除蒸馏水外，其他成分加倍。 17.4 伊红美琼脂（EMB）培养基 成分 蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 2g 2%伊红溶液 20ml 0.65%美兰溶液 10 ml 蒸馏水 1000ml PH7.1 制法 将蛋白胨，磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于三角锥瓶内，在121℃下高压灭菌15分钟后备用。 临用时加入乳糖并加热熔化琼脂，冷却至50—60℃，加入伊红和美蓝溶液摇匀，浇注平板。 17.5 远藤氏培养基 配方： 蛋白栋 10.0g 乳糖 10.0g 磷酸氯二钾 3.5g 亚硫酸氢钠 2.5g 碱性品红 0.4g 琼脂 10.0g 蒸馏水 100ml 制备： 配料放入蒸馏水中，搅拌15分钟，使其溶解，分装到三角瓶或试管，121℃灭菌20分钟， 冷却后贮于暗处，最佳温度为4—8℃以保持浅粉红色。 17.6 UBA培养基 酵母浸膏 6.1g 蛋白胨 15g 番茄汁（244ml） 12.2g 葡萄糖 16g K2HPO4 0.31g KH2PO4 03.1g MgSO²7H2O 0.12g NaCl 0.006g FeSO4²7H2O 0.006g MnSO4²H2O 0.006g 琼脂12g蒸馏水 750ml 啤酒 250g 将上述配料加入水中，加热至沸，搅拌至完全溶解，趁热加入未脱气的啤酒，轻轻搅拌混合，用HCI或NaOH调pH为6.0+0.1，分装于三角瓶中，，121℃蒸汽灭菌20min。 待冷却后，放置在36±℃培养24h小时备用。 17.7 乳酸杆菌培养基 UBA+ABP抑制剂溶液（UBA见前） ABP抑制剂溶液 配料 放线菌酮 0.1g 溴甲酚绿 0.15g 无离子水 80ml 2-苯乙醇 20ml 配制 把溴甲酚绿放入50毫升水中，煮沸至完全溶解，把放线菌酮溶于30毫升水中，将两种溶液混合，分装于带螺旋盖的瓶中，每瓶20毫升，在121℃蒸汽灭菌10分钟，冷却后，每个瓶内加5毫升2-苯乙醇，并拧紧瓶盖。 该溶液会分成两层，使用前须用力摇匀。 17.8 KOT培养基 配方 胰朊酶蛋白胨 5.0g 麦汁浸出生 2.5g 酵母浸出物 2.5g 肝浓缩物 1.0g 麦芽糖 5.0g 葡萄糖 5.0g L-苹果酸 0.5g 吐温-80 1ml K2HPO4 0.5g MgSO4²7H2O 0.125g MnSO4²5H2O 0.025g 盐酸半光氨酸 0.5g 胞苷 0.2g 胸苷 0.2g 啤酒 800ml 放线菌酮 100ml NaN3 50mg 琼脂 20g 蒸馏水至 100ml PH25.4 17.9 日本KL-2B培养基 配方： 胰蛋胨 20.0g 麦汁浸生物 10.0g 酵母浸出生 5.0g 麦芽糖 10.0g K2HPO4 3.0g MgSO4²7H2O 1.0g MnSO4²5H2O 0.25g 柠檬酸 2.75g 吐温-80 100mg NaN3 50mg 琼脂 20g 蒸馏水至 1000ml PH5.2 17.10 MRS麦芽糖琼脂培养基 没有一种单独的方法能够检测所有的乳酸细菌，这些细菌对各种糖的利用能力是有差别的，许多菌株能在好氧条件下在琼脂培养基上生长，而另一些菌株则更容易在厌氧条件下生长。 下面列出的培养基，能检测出许多种的乳酸细菌。 但是，这些培养基不是绝对的，使用者可根据自己的经验进行修正后采用。 原理：液体样品培养在含有合适的不同种类琼脂培养基的培养皿中，计算活菌落数。 麦芽糖 5.0g 蛋白胨 10.0g 牛肉浸膏粉 8.0g 酵母浸出物 4.0g 葡萄糖 20.0g 吐温-80 1.0ml K2HPO4 2.0g 醋酸钠 5.0g 柠檬酸铵 2.0g MnSO4²5H2O 0.2g MgSO4²7H2O 0.05g 琼脂 15g 在蒸馏水中溶解，并定容至1L。 用1.0NHCl或0.1NNaOH调至4.7。 蒸汽灭菌121℃，20分钟。 17.11 Ra-Ray培养基 NBB培养基是德国进行啤酒有害菌检查常用培养基，正如大家所知德国在有害菌研究领域处于领先地位，所以很多文献中提到使用NBB培养基有必要讲清楚。 NBB培养基是专门为检查啤酒有害菌而开发的。 NBB培养基分三种，NBB-A（琼脂型）、NBB-B（试液型）、NBB-C（浓缩型），最近又推出NBB-Am，是在NBB-A的基础上开发的。 NBB培养基是专利产品，由德国Doher公司制造销售。 NBB-A适用于刷洗水、啤酒为样品的细菌检查。 NBB-B适用于酵母（回收酵、培养酵母）的细菌检查。 NBB-C适用于有酵母的混浊啤酒（发酵液、未过滤啤酒）。 培养温度：25-28℃ 培养时间：严重污染样品，1天可以检出。 污染轻微或生长缓慢的菌5天左右。 培养条件：厌氧二氧化碳充气下。 注：虽然NBB有很高的检出率，但由于样品过滤或残有空气都可能使Pectinatus菌、Megashaera菌不能检出。 17.12 LMDA培养基 番茄汁固形物 蛋白胨 2% 泛酸钙 0.2% 酵母浸膏 1% 葡萄糖 1% 碳酸钙 0.5% 柠檬酸 0.11% 磷酸氢二钾 0.05% 磷酸二氢钾 0.05% 硫酸镁 0.02% 硫酸锰 0.001% 氯化钠 0.001% 硫酸铁 0.001% 溴甲酚红绿 0.0022% 吐温-80 0.05% 放线菌酮 0.0007% 琼脂 1.5% 配制 加水溶解，分装三角瓶，121℃蒸汽灭菌10分钟，冷却后，避光保存。 17.13 日本Pectinatus属菌检出培养基 配方： 蛋白胨 10.0g 麦芽浸出物 8.0g 酵母浸出物 4.0g K2HPO4 2.0g NaCl 5.0g MgSO4²7H2O 0.2g MnSO4²5H2O 0.05g 吐温-80 1ml L-Cystine-HClCMonnhydrate 0.5g Resazurin钠盐 1mg Erythromycin 5mg 琼脂 20g 蒸馏水至 1000ml PH6.0 17.14 麦汁液体培养基 取原麦汁（头滤麦汁），用单层滤纸过滤后，冷却至40℃以下。 过滤后的原麦汁800—1000ml中加一个蛋清，（加蛋清之前，往蛋清里加少许蒸馏水或麦汁充分搅匀，产沫为止，然后加入麦汁里）混匀。 加热煮沸（最好间接加热）20—30分钟，然后冷却至70℃左右后用双层滤纸过滤。 把过滤后的麦汁冷却至20℃后，测糖度，然后稀释至糖度为12°P。 调整PH值为5.4—5.7，然后分装（试管加6ml，小三角锥瓶加50ml，中三解瓶加200ml），用牛皮纸包扎。 在高压灭菌锅里110℃压力下，灭菌20分钟。 17.15 麦汁固体培养基 步骤同上 调整PH值为5.4—5.7后，加1.5—2.0%的琼脂粉，加热（最好间接加热）溶化琼脂，分装，包扎。 在高压灭菌锅里110℃下，灭菌20分钟，冷却至60℃左右后，摆斜面或倒平板。 17.16 WLN琼脂培养基 酵母浸膏 4.0g 干酷素酮 5.0g 葡萄糖 50.0g 磷酸二氢钾 0.55g 氯化钾 0.425 g 氯化钙 0.124g 氯化铁 0.0025g 硫酸镁 0.125g 硫酸锰 0.0025g 琼脂 20.0g 溴甲酚绿 0.022g 蒸馏水 1.0L 上述组分除琼脂外溶解于蒸馏水中，调整溶液PH为5.5，加琼脂，很好混合，加热，使琼脂溶解，高压斧121℃蒸汽灭菌不少于15min，冷却至40—45℃，分装于无菌培养皿中。 17.17 YPD培养基 配方： 酵母浸出物 10g 蛋白胨 20g 葡萄糖 20g 琼脂 20g 蒸馏水 1000ml 溶解后121℃灭菌15分钟，冷却，制成平皿固体培养基。 17.18 TTC琼脂培养基 溶液A： 三苯基四唑氯2.0g 磷酸缓冲液100.0ml （磷酸缓冲液浓度为0.134mol/L，PH7.2）（无水NaH2PO41.26g，无水Na2HPO41.16g加水溶解至100ml） 溶液B： 琼脂20.0g 蒸馏水100.00ml 制备溶液A和B。 制备溶液B时要加热使琼脂溶解。 两溶液混合，冷却至45℃。 17.19 MYGP培养基 配方 酵母浸膏 3.0g 麦牙浸出物 3.0g 蛋白胨 5.0g 葡萄糖 10.0g 琼脂 15.0g 吐温-80 10ml 冷蒸馏水 1000ml 配制： 把配料放入水中，边搅拌边加热至沸，然后分装到带螺旋盖的瓶内，121℃蒸汽灭菌10分钟。
一次性琼脂平板怎么用
方法一 菌落计数总数之稀释倒平板法此方法是2010年版国家标准 GB 4789.2-2010中的菌落总数计数方法。 1、称取平板计数琼脂23.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，灭菌完成后，将获得的平板计数琼脂培养基置于45度水浴中备用。 2、样品的稀释及处理。 取样品25g或者25ml，溶解于225ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，然后使得样品充分溶解和混匀。 此时的样品浓度是稀释了原样品10倍。 3、10倍梯度稀释样品液。 取样品溶解液1 ml，加入9ml 无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，吹打均匀，此时的溶液样品浓度是原始样品的0.01倍。 每次吸取上一个样品1 ml，加入到9ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，根据这个方法继续进行样品的连续梯度稀释。 4、 选择2-3个合适的稀释度，吸取该稀释度的1 ml稀释液于无菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。 5、稀释液移入平皿后，及时将凉至45-50 ℃的琼脂培养基(可放置于45℃水浴箱保温) 注入平皿约15-25 mL，并转动平皿使菌液稀释液和琼脂培养基混合均匀咨询记录 · 回答于2022-12-06平板计数琼脂使用方法方法一 菌落计数总数之稀释倒平板法此方法是2010年版国家标准 GB 4789.2-2010中的菌落总数计数方法。 1、称取平板计数琼脂23.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，灭菌完成后，将获得的平板计数琼脂培养基置于45度水浴中备用。 2、样品的稀释及处理。 取样品25g或者25ml，溶解于225ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，然后使得样品充分溶解和混匀。 此时的样品浓度是稀释了原样品10倍。 3、10倍梯度稀释样品液。 取样品溶解液1 ml，加入9ml 无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，吹打均匀，此时的溶液样品浓度是原始样品的0.01倍。 每次吸取上一个样品1 ml，加入到9ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，根据这个方法继续进行样品的连续梯度稀释。 4、 选择2-3个合适的稀释度，吸取该稀释度的1 ml稀释液于无菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。 5、稀释液移入平皿后，及时将凉至45-50 ℃的琼脂培养基(可放置于45℃水浴箱保温) 注入平皿约15-25 mL，并转动平皿使菌液稀释液和琼脂培养基混合均匀方法二：菌落总数计数平板涂布法1、称取平板计数琼脂23.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。 2、待冷却至55°C时倒20ml培养基到90mm无菌培养皿中，冷却后成为可以使用的平板计数平板，待表面干燥后使用。 对于酵母和霉菌含量高的样品，则用100mm培养皿，每个培养皿倒入20-25ml培养基。 待琼脂表面干燥后使用。 3、样品的稀释及处理。 取样品25g或者25ml，溶解于225ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，然后使得样品充分溶解和混匀。 此时的样品浓度是稀释了原样品10倍。 4、10倍梯度稀释样品液。 取样品溶解液1 ml，加入9ml 无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，吹打均匀，此时的溶液样品浓度是原始样品的0.01倍。 每次吸取上一个样品1 ml，加入到9ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，根据这个方法继续进行样品的连续梯度稀释。 5、 选择2-3个合适的稀释度，吸取该稀释度的0. 1 ml或者0.2 ml稀释液于倒好的计数平板中，每个稀释度做两个琼脂平板。 6、使用无菌的玻棒或者其他无菌涂布物品，将我问的是，可以检测在食品车间的员工，检测细菌和沉降菌，平坂计算营养琼脂培养基，这个试剂可以用吗？这个试剂可以用于车间、检测人员细菌吗？请回答？可以用吗？这个是实验室用的规格比较高车间的话也得按这样的方法但是可以简化过程，就是基本按这个操作来，是没有问题的，因为毕竟是实验室数据食品车间的环境要求是很高的，按照这个操作不会有问题那么，还是不确定啰？不是不确定，而是这个比较复杂，你可以找个新的方法，因为你要点到车间的话，肯定是要又快又准或者你采集车员，要么到实验室去检测另找方法吧，太麻烦我问的是试剂可以使用伐？说明你也不懂。 你看看你从头到尾问的是个啥？你开始问的是使用方法不要问试剂能否使用车间都跟你说了，这个东西是可以用的，但是他的比较的复杂，就是整体的要把这个数据测出来的方法比较复杂，我已经把整个方法流程都给了你了问题还没解决？快来咨询专业答主~平板计数琼脂使用方法在线4239位答主在线答服务保障专业响应快马上提问抢首赞分享评论长沙 24小时有没有拉死人的车服务先运送/后收费/满意付款最近53分钟前有人拨打电话咨询问题为满足亲人对逝者的缅怀，叶落归根弥留时夙愿。 专业提供各类带冰棺拉死人的车/骨灰运送车/跨省遗体运输车深圳市龙岗区万吉医疗护送服务...广告一般车险买哪。 几种，爆款好货热卖，上淘宝，逛着买更轻松!广州华晨车之家补差价 邮费补差价 产品商品差价￥1 元XC6SLX25T-2FGG484I XC6SLX25T-2FGG484C 全新原装正品 原厂渠道￥700 元XC6SLX75T-2FGG484I XC6SLX75T-2FGG484C 全新原装正品 原厂渠道￥1300 元XC7A35T原装XC7A50T XC7A75T XC7A100T XC7A200T CSG324C FGG484C￥100 元全新DFA50CB80 DFA150CB160 DFA150CB80 DFA200CB160 DFA200CB80￥170 元广告为什么平板计数琼脂培养基在使用前要保持温度在45度左右?如何保持?pdd老师好评答主温度太高容易产生冷凝水，在涂布时，如果有水滴下来的话，会形成菌苔，不易计数。 温度太低培养基容易凝固，如果倒出的培养基有凝块的话，有些实验是会导致失败的，如噬菌体的效价。 一般刚配好的培养基可以放冷水下面冲，等到它不烫手时就可以倒平板了，倒好的平板为防止冷凝水形成，可以叠在一起放。 2022-06-21服务人数100(Baird-Parker)BP琼脂平板如何配制阿浩老师iii学生2022高考纪念配制方法：称取本品6.3g于95ml蒸馏水或去离子水中，加热煮沸至完全溶解，定容,121℃高压灭菌15分钟,灭菌结束后请摇匀,以防琼脂沉积于器皿底部而凝固，冷至50℃,加入1支（亚碲酸钾卵黄增菌液）,轻轻摇匀后倾注平板。 Formula(配方)： g/L Tryptone （胰蛋白胨）：10.0gYeast Extract(酵母浸粉) ：1.0gBeef Extract(牛肉浸粉) ：5.0gSodium Pyruvate (丙酮酸钠) ：10.0gGlycine(甘氨酸) ：12.0gLithium Chloride(氯化锂) ：5.0gAgar(琼脂) ：20.0gpH7.0±0.2(25℃)2022-05-07服务人数1390平板计数琼脂使用方法 — 找答案，就来「问一问」1234位专家解答5分钟内响应 | 万名专业答主— 你看完啦，以下内容更有趣 —哪个保险公司保险好_宏利人寿保险值得一看的保险公司相关信息推荐宏利人寿保险 (国际) 广告培训机构 考勤系统-淘宝热卖好物汇集，品牌众多，放心购!淘宝热卖广告都说固态硬盘寿命短，那么有谁把使用寿命用完了吗，大家咋看待的呢？跑这个服务的机器，一共就小几十台，几乎每个月都有损坏的。 涉及文件系统的往往是突然变只读了之类的。 一4条回答·1,690人在看查银行流水可以确定网赌吗91播放45岁大S复出捞金狂赚百万，是什么原因让她选择重回娱乐圈呢？0播放平板计数琼脂使用方法 — 找答案，就来「问一问」1234位专家解答5分钟内响应 | 万名专业答主男子1个半月狂偷自助超市33次，如何看待这一做法，该男子会被如何处罚？这个男子的行为本身就属于偷窃，同时也非常没有道德感。 从某种程度上来说，我们的社会在不断进步，社会上的1条回答·51人在看钉钉人脸识别考勤机工地实名制人脸识别人行通道闸景区票务闸机￥50 元￥50 元购买广告中石化齐鲁分公司2人中毒死亡事故调查报告公布，其中哪些信息值得关注？根据央视网的信息报道，山东淄博中石化齐鲁分公司发生了严重的中毒事故，根据中毒事故的调查报告公布，我们5条回答·66人在看
有关培养基的知识？！
培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。 有的培养基还含有抗菌素和色素，用于单种微生物培养和鉴定。 简介培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含培养基有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及生长素和水等。 有的培养基还含有抗菌素、色素、激素和血清。 培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。 一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。 对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在2~6℃的冰箱内。 由于液体培养基不易长期保管，现在均改制成粉末。 化学分类固体培养基天然培养基指一类利用动、植物或微生物体包括其提取物制成的培养基。 如牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基等。 组合培养基又称为合成培养基或综合培养基，是一类按微生物的营养要求精确设计后用多种高纯化学试剂配制成的培养基。 如葡萄糖铵盐培养基、淀粉硝酸盐培养基等。 半组合培养基指一类主要以化学试剂配制，同时还加有某种或某些天然成分的培养基。 例如，马铃薯蔗糖培养基。 物理分类液体培养基一类配制成的液体状态的基质。 液体培养基固体培养基一类配制成的固体状态的基质。 根据性质又分为固化培养基、非可逆性固化培养基、天然固态培养基、滤膜。 半固体培养基指在液体培养基中加入少量的凝固剂而配制成的半固体状态的培养基。 脱水培养基又称预制干燥培养基，指含有除水分外的一切成分的商品培养基。 微生物分类选择性培养基：一类根据某微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基，具有使混合菌样中的劣势菌变成优势菌的功能，广泛用于菌种筛选等领域。 鉴别培养基：一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便的从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基。 例如，伊红美蓝乳糖培养基（EMB）。 常见培养基细菌培养基牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏0.3g，蛋白胨1.0g，氯化钠0.5g，琼脂 1.5g，水 100ml 在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。 待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。 等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2～7.6,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌：1.05千克每平方厘米、121摄氏度维持15~30分钟。 马铃薯培养基 取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀细细剁成肉末后，加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。 在细菌培养基烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖2小时。 过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液pH值调到7.5左右。 每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。 根瘤菌培养基 葡萄糖10g磷酸氢二钾0.5g 碳酸钙3g 硫酸镁0.2g 酵母粉0.4g 琼脂20g 水1000ml 1%结晶紫溶液1ml 先把琼脂加水煮沸溶解，然后分别加入其他组分，搅拌使溶解后，分装，灭菌，备用。 放线菌培养基淀粉硝酸盐培养基（高氏一号培养基） 可溶性淀粉 2.0g 硝酸钾0.1g 磷酸氢二钾0.05g氯化钠0.05g 硫酸镁0.05g 硫酸亚铁0.001g 琼脂2g 水100ml 先把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。 在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。 调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。 面粉琼脂培养基 面粉60g琼脂20g 水1000ml 把面粉用水调成糊状，加水到500ml，放在文火上煮30分钟。 另取500ml水，放入琼脂，加热煮沸到溶解后，把两液调匀，补充水分，调整pH值到7.4，分装，灭菌，备用。 微藻培养基BG-11培养基 NaNO31.5g K2HPO4 ·3H2O 0.04g MgSO4·7H2O0.075g CaCl2 ·2H2O 0.036g Citric Acid （柠檬酸 ）0.006g Ferric ammonium citrate（柠檬酸铁铵）0.006gEDTA (dinatrium-salt) 0.001g Na2CO3 0.02g A5 + Co solution * （A5溶液1000×）1mlDistilled Water （蒸馏水）919ml SE培养基 NaNO3 0.25gK2HPO4. 3H2O 0.075gMgSO4. 7H2O 0.075gCaCl2. 2H2O 0.025gKH2PO4 0.175gNaCl 0.025Soilextract 40mlFeCl3·6H2O 0.005Fe—EDTA 1mlA5solution 1000× 1mldistilledwater 958mlSoil Extract(土壤提取液)配置方法 取花园土未施过肥0。 5kg置于烧杯或三角瓶中，加入蒸馏水1000毫升，瓶口用透气塞封口，在水浴中沸水加热2小时，冷却数小时，在无菌条件下过滤，取上清液，将灭菌蒸馏水加入上清液至总体积1000毫升。 土壤提取液保存在4ºC备用。 Compositionof the A5 solution Addto 100 ml of distilled water: H3BO3 286mgMnCl2. 4H2O 181mgZnSO4. 7H2O 22mgCuSO4. 5 H2O 7.9mg(NH4）6Mo7O24 .4H2O 3.9mgEDTA-Fe的配置方法： 将EDTA和FeCl3·6H2O分别溶于水和HCl(0.1N),混匀即可。 Na2EDTA 1gdistilledwater 50mlFeCl3·6H2O 81mgHCl（0.1N） 50mlPr培养基 Preparation:to 997 mL of glass-distilled water, add 1.0 g proteose peptone, 15.0 g agar,and the following stock solutions: workingsolution g/1000mL H2ONaNO3 0.25CaCl2.2H2O 0.025MgSO4.7H2O 0.075K2HPO4 0.075KH2PO4 0.175NaCl 0.025A5solution 1mlEDTA-Fe 1mlFeCl3(0.05%) 1mlA5溶液和EDTA-Fe溶液配制方法同上。 真菌培养基萨市（Sabouraud’s）培养基 蛋白胨10g 琼脂20g 麦芽糖 40g 水1000ml 先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40g麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。 本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。 马铃薯糖琼脂培养基 把马铃薯洗净去皮，取200g切成小块，加水1000ml，煮沸半小时后，补足水分。 在滤液中加入10g琼脂，煮沸溶解后加糖20g（用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖），补足水分，分装，灭菌，备用。 把这培养基的pH值调到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。 豆芽汁培养基 黄豆芽100g琼脂15 g 葡萄糖20g 水1000ml 洗净黄豆芽，加水煮沸30分钟。 用纱布过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解后放入糖，搅拌使它溶解，补足水分到1000ml，分装，灭菌，备用。 把这培养基的pH值调到7.2～7.4，可用来培养细菌和放线菌。 豌豆琼脂培养基 豌豆80粒琼脂 5g 水200ml 取80粒干豌豆加水，煮沸1小时，用纱布过滤后，在滤液中加入琼脂，煮沸到溶解，分装，灭菌，备用。 琼脂食用菌菌种培养基马铃薯-蔗糖-琼脂培养基 20%马铃薯煮汁 1000ml 蔗糖20g 琼脂18g 把马铃薯洗净去皮后，切成小块。 称取马铃薯小块200g，加水1000ml，煮沸20分钟后，过滤。 在滤汁中补足水分到1000ml，即成20%马铃薯煮汁。 在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，补足水分，分装，灭菌，备用。 使用该培养基对pH值要求不严格，可以不测定。 综合马铃薯培养基 20%马铃薯煮汁1000 ml 磷酸二氢钾3g 硫酸镁1.5g葡萄糖20g 维生素10mg 琼脂18g 先配制20%马铃薯煮汁，方法同上。 在煮汁中加入上述各种组分，加热溶解后补足水分，调整pH值到6。 分装，灭菌，备用。 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。 烟草的培养基在植物组织培养时，通过调节IAA和CTK的比值能影响愈伤组织分化出根或芽。 CTK/IAA高时,愈伤组织分化芽 CTK/IAA低时，分化根；CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化 愈伤组织诱导培养基制备 以MS培养基母液为基础,向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,铁盐100×母液20mL ,维生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培养基后，再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水，加入40g蔗糖后搅拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl调整pH值至5.8-6.0.加入14g琼脂，将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂完全溶化，然后用蒸馏水定容至终体积2L,继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中。 烟草叶片愈伤组织诱导烟草取一无菌培养皿，用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中,并用解剖刀将叶片切成2mm2左右的小片，然后将其接种于准备好的培养基上,每瓶接种5小片，一共接种6瓶。 接种后的三角平置于24条件下黑暗培养1周,然后在同样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成(两种情况各置3瓶).观察愈伤组织诱导结果，统计愈伤组织诱导率。 器官分化及植株再生培养 将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照，温度20-22 C条件下培养3周,统计愈伤组织再生植株情况. 愈伤组织诱导的总体情况 烟草愈伤组织诱导培养4周后,愈伤组织基本形成，即排除因生长时间不够而未形成愈伤的情况。 具体情况见表一中所示,6瓶培养物均有愈伤形成，且都未发生污染,但诱导率几乎各不相同.其中， 在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为60.0℅, 在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%.由于实验过程中，外植体即烟草叶片取得偏小,接种时可能已有部分外植体的大部分细胞脱水死亡，使整个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小。 动物细胞培养基RPMI1640培养基是一个全营养型培养基，广泛应用于哺乳动物细胞和杂交瘤细胞的培养，如人骨髓瘤细胞、鼠杂交瘤细胞、人白细胞以及B细胞和T细胞。 最初设计用于悬浮细胞培养和人白血病细胞的单层细胞培养。 特殊培养基选择性培养基 选择性培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。 其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选效率。 酵母菌富集培养基 葡萄糖5%尿素0.1% 硫化铵0.1% 磷酸二氢钾0.25% 磷酸氢二钠0.05% 七水合硫酸镁0.1% 七水合硫酸铁0.01% 酵母膏0.05%孟加拉国红0.003% pH4.5 Ashby无氮培养基 富集好氧自生固氮菌 甘露醇1%磷酸二氢钾0.02% 七水合硫酸镁0.02% 氯化钠0.02% 二水合硫酸钙0.01% 碳酸钙0.5%鉴别培养基EMB培养基 常用于鉴别 蛋白胨10g乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氢二钾2g 伊红Y 0.4g 美蓝0.065g蒸馏水1000g pH7.2 2216E培养基配方 分离海洋微生物的培养基配方 蛋白胨5g 酵母膏1g 磷酸高铁 0.01g 琼脂15~20g 陈海水 1000ml 煮沸氢氧化钠（5%）的溶液调PH值7.6~7.8 伊红美蓝培养基 可用于检测水中大肠杆菌的含量 首先按以下组成配制基础培养基。 蛋白胨10gNaCl 5g 琼脂15~20g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000mL，调节pH为7.6.灭菌后，冷却至60℃左右，再按下面的比例，在无菌操作条件下加入灭菌的乳糖溶液、伊红水溶液以及美蓝水溶液。 摇匀后，立即倒平板。 溶液中的乳糖在高温下会破坏，因此一般使用压力为70kPa、温度为115℃的条件灭菌20min. 基础培养基 100mL 20%乳糖溶液2mL 2%伊红水溶液 2mL 0.5%美蓝水溶液1mL天然细胞培养基——血清天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。 组织培养技术建立早期，体外培养细胞都是利用天然培养基。 但是由于天然培养基制作过程复杂、批间差异大，因此逐渐为合成培养基所替代。 目前广泛使用的天然培养基是血清，另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。 血清种类 目前用于组织培养的血清主要是牛血清，培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。 选择用牛血清培养细胞的原因：来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解。 牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的，但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。 牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。 牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清。 胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。 显然，胎牛血清是质量最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。 血清的主要成分血清样本血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。 血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。 血清主要作用 1．提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。 2．提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。 生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。 3．提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。 结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。 4．提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。 5．对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。 这种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。 因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。 血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。 血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用，如SeO3,硒等。 血清培养基主要问题 1．血清的成份可能有几百种之多，目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识，这给研究工作带来许多困难。 2．血清都是批量生产，各批量之间差异很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保证每批血清的相似性极为困难，从而使实验的标准化和连续性受到限制。 3．对大多数细胞，在体内状态，血清不是它们接触的生理学液体，只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态，血清可能促进某些细胞的生长（成纤维细胞）同时抑制另一类细胞生长（表皮细胞）。 4．血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应（如精胺、亚精胺）形成有细胞毒性作用的聚精胺。 补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡。 5．动物个体不同，血清产地、批号不同，每批质量差异甚大，其成分不能保持一致。 6．取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响，可能导致实验失败或实验结果不可靠性。 7．大规模生产中，血清来源越来越困难，价格昂贵，是构成动物细胞培养对生产成本的主要部分之一。 血清的质量标准 血清质量高低取决于两方面因素：一是取材对象，二是取材过程。 用于取材的动物应健康无病并且在指定的出生天数之内，取材过程应严格按照操作规程执行，制备出的血清要经过严格的质量鉴定。 WHO公布的《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求： 1．牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家。 并应具备适当的监测系统。 2．有些国家还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。 3．证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。 4．血清要通过滤膜过滤除菌，保证无菌。 5．无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染，有些国家要求无细菌噬菌体污染。 6．对细胞有良好的支持繁殖作用。 我国在对牛血清的质量2000年版《中国生物制品主要原辅料质控标准》中提出比较严格的标准要求。 包括蛋白质含量，细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素，支持细胞增殖检查。 外周血培养基配制一、配制用水 培养基的大部分是水，所以水的质量直接影响培养基的质量。 按Waymouth标准，水的电阻应为200万奥姆，一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的 双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。 二、培养基 培养基有天然、人工两种。 一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。 NaHCO3（或HCl）调pH至7.2～7.4，若pH值超 过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。 RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。 三、血清 培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。 血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。 配制时含 量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。 由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。 四、抗菌素 为防止培养时期细菌的污染，可在培养基中添加适当抗菌素，一般用量与组织细胞培养相同：卡那霉素100单位/毫升，或双抗--青霉素100单位/ 毫升，链霉素100微克/毫升。 五、植物血凝素（PHA） 非增殖期的细胞不能制备染色体，如人外周血淋巴细胞，但在离体培养过程中，在PHA的作用下，可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。 经实验测定其分裂高峰分别于培养后44—48小时和68—72小时。 PHA有粘多糖，蛋白质两种重要成分。 粘多糖促使有丝分裂，蛋白质起凝集作用。 PHA激活的细胞数随其浓度而增加，直至全部免疫活性细胞均 被激活为止，但PHA浓度过高会引起凝集，一般采用4%浓度为好。
